离体皮肤模型评价样品舒缓功效

【实验原理】

皮肤在接触刺激性较强的一些化学物质或紫外线后，会导致皮肤发生急性损伤，造成皮肤干燥、炎症反应、红肿过敏等现象。阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（Sodium lauryl sulfate，SLS）具有双亲性（亲水性和亲脂性）特征，在较大浓度下接触皮肤后能够损伤皮肤屏障，尤其是屏障中的脂质成分以及细胞膜，进一步造成皮肤细胞的损伤。TNF-α为一种促炎因子，含有疏水性的末端的多肽，当炎症相关通路激活后可以分泌到细胞外，介导炎症反应。IL-1α为一种促炎因子，为一种无疏水性的多肽，只有细胞膜损伤后才能释放到细胞外。炎症因子 IL-6和IL-8是表征炎症反应的相关指标，炎症发生后会大量分泌，趋化免疫细胞的迁移，介导炎症的级联放大。当待测样品作用后，炎症因子的含量显著性降低，说明样品具有舒缓的功效。PGE2 为前列腺素，是花生四烯酸代谢产物，主要作用是诱发炎症反应，待测样品作用后，PGE2的含量减少，说明样品具有舒缓的功效。

 组织形态是通过 H&E 染色后进行的组织微观生理学结构分析，通过组织学形态检测，可以看出不同处理条件下皮肤结构及皮肤屏障的变化情况，例如 SLS 损伤后皮肤屏障疏松，活细胞层厚度减少，而活性物处理后显著改善这种损伤。

因此，可采用阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（Sodium lauryl sulfate，SLS）刺激离体皮肤，构建体外皮肤损伤模型，通过检测样品作用后皮肤模型中促炎因子（TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8）以及炎性介质（PGE2）含量的变化，评价样品的舒缓功效。

【评价指标】

1、组织形态（H&E染色）

2、炎症因子（ELISA）：TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8含量

3、炎性介质（ELISA）：PEG2含量

【实验方案】

1、组织形态检测（H&E染色）：

离体皮肤获取与消毒——离体皮肤无菌培养——SLS造模及加药处理（空白对照组：不处理；模型对照组：SLS处理；阳性对照组：SLS+阳性药处理；样品组：SLS+待测样品处理）——石蜡包埋及切片——H&E染色——显微镜拍照

2、炎症因子和炎性介质检测（ELISA）：

离体皮肤获取与消毒——离体皮肤无菌培养——SLS造模及加药处理（空白对照组：不处理；模型对照组：SLS处理；阳性对照组：SLS+阳性药处理；样品组：SLS+待测样品处理）——收样——ELISA检测——结果分析

【结果展示】

图1 组织形态的H&E染色（图来自于网络，仅供参考，具体视实验结果而定）

图2 炎症因子或炎性介质的ELISA检测（图来自于网络，仅供参考，具体视实验结果而定）

【参考文献】

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