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一、实验材料
动物:裸鼠(SPF级环境),雄性,6~8周龄
细胞:实验室现有细胞系 或客户提供
二、 实验方法
1.制备细胞悬液
1)肿瘤细胞用含体积分数10%胎牛血清、100 IU/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的培养基(RPMI 1640或高糖DMEM),于37 °C、5% CO2 饱和湿度的培养箱中传代培养。复苏细胞需传代2次后进行接种
2)取对数生长期细胞,经胰蛋白酶消化后离心,PBS洗1遍,用无血清培养基将细胞重悬,进行计数,将细胞悬液浓度调整至合适接种浓度。
(接种浓度根据预实验结果确认)
2.接种
A.细胞悬液与基质胶混合后,进行皮下接种。(默认为前肢腋下),
B.瘤组织块接种(避免细胞接种的不均匀性)先用细胞接种2只鼠待2-3周肿瘤约1-1.5g, 取瘤组织粉碎后接种50mg/只
接种后分为以下组别:
1)对照组:空白对照
2)阳性药物组:根据客户的受试药物来挑选
3)实验组(低、中、高三种剂量)
细胞接种造模每组不少于10只(考虑到小鼠成瘤率,10只能保证最后至少获得6个有效数据。预实验做3-5只即可),瘤组织接种每组6-8只
3.给药
1)当肿瘤长到100mm3,即可开始分组进行给药。给药起始点也可以由客户提供
三、检测指标
1)给药期间,检测瘤体积、体重,绘制曲线。
2)给药完成后,取出瘤体,测量尺寸并拍照。
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