皮肤外植体模型评价样品抗皱功效——XVII（或I、III、IV、V、VII）型胶原蛋白+胶原纤维

【实验原理】

皱纹是皮肤衰老最直观的表现，皱纹的形成与自然老化、光老化、空气污染、生活习惯等密切相关。皮肤表皮变薄，角质形成细胞增大且角化不全，真皮成纤维细胞减少，细胞外基质中胶原蛋白、弹性蛋白等成分减少等都是造成皮肤松弛产生皱纹的主要原因。

细胞外基质（ECM）主要由结构性蛋白、黏连性蛋白和无形胶状结构构成。人体皮肤表达的胶原蛋白主要有I、III、IV、V、VI、VII、XIV、XVII及XVIII型胶原蛋白，其中I型胶原蛋白是ECM的最主要组成成分，占总胶原的80%，起皮肤结构支架的作用。真表皮连接（DEJ）是由表皮基底层的角质形成细胞与真皮共同参与构成发一种柔韧的网膜结构。DEJ的主要成分有Ⅳ型胶原蛋白、Ⅶ型胶原蛋白、XVII型胶原蛋白、层粘连蛋白、巢蛋白/内功素 、串珠素等。

紫外线辐射是造成皮肤光老化和形成皱纹的主要因素，长期暴露于紫外线中会导致皮肤ECM降解、DEJ功能紊乱、胶原蛋白和弹性蛋白减少、MMPs分泌增多等。因此可采用紫外照射皮肤外植体建模，通过免疫荧光方法检测皮肤外植体组织中XVII（或I、III、IV、V、VII）型胶原蛋白的表达，或通过马松染色检测胶原纤维密度，以此来评价待测样品的抗皱功效。

【评价指标】

1、XVII型（或I型、III型、IV型、V型、VII型、XVII型）胶原蛋白

2、胶原纤维

【实验方案】

实验一 XVII（或I、III、IV、V、VII、XVII）型胶原蛋白检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体处理及无菌培养——造模及加药处理：正常对照组（不处理）、模型对照组（UV辐射处理）、样品组（UV辐射+待测样品处理）——OCT包埋——冷冻切片—— 胶原蛋白免疫荧光染色——荧光显微镜拍照及分析；

实验二 胶原纤维检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体处理及无菌培养——造模及加药处理：正常对照组（不处理）、模型对照组（UV辐射处理）、样品组（UV辐射+待测样品处理）——固定——石蜡包埋——石蜡切片—— 马松染色——显微镜拍照及分析；

【结果展示】

图1. 皮肤外植体I型胶原蛋白表达典型图及荧光分析典型图

图2. 皮肤外植体III型胶原蛋白表达典型图及荧光密度分析典型图

图3. 皮肤外植体IV型胶原蛋白表达典型图及荧光分析典型图

图4. 皮肤外植体V型胶原蛋白表达典型图及荧光分析典型图

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图5. 皮肤外植体VII型胶原蛋白表达典型图及荧光分析典型图（图片来源文献，仅供参考）

图6. 皮肤外植体XVII型胶原蛋白表达典型图及荧光分析典型图（图片来源文献，仅供参考）

图7. 皮肤外植胶原纤维染色及分析典型图

【评价结论】

在本次实验条件下，与模型组相比，样品处理组的皮肤外植体组织中XVII（或I、III、IV、V、VII、XVII）型胶原蛋白的荧光强度显著增加，胶原纤维密度显著增加，表明样品具有抗皱功效。

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