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【实验原理】
糖化反应,又称美拉德反应,是指还原糖、脂质过氧化物、氧化氨基酸的羰基等与蛋白质的氨基结合而发生的缓慢的非酶促反应,最终形成不可逆的共价聚合物,称为晚期糖基化终末产物(简称 AGEs)。AGEs会随年龄不断积累,表现在皮肤上就是发黄、松弛、粗糙、暗淡,以及产生皱纹。糖化反应还会影响真皮ECM的功能,并通过受体激活下游多条信号通路,影响组织、细胞功能,使皮肤细胞衰老。甲基乙二醛(MGO)是人体代谢中产生的非酶促副产物,可诱导蛋白质和核酸的不可逆糖基化,促进AGEs的产生。因此可使用皮肤外植体模型,通过检测MGO造模及受试样品处理后皮肤组织中AGEs的产生来评价样品的抗糖化功效。
【评价指标】
晚期糖基化产物AGEs
【实验方案】
皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体无菌培养——MGO造模及加药处理(空白对照组:不处理;模型对照组:MGO处理;样品组:MGO+待测样品处理)——固定——脱水——石蜡包埋——石蜡切片——免疫组化染色——显微镜拍照及分析
【结果展示】
图1 皮肤外植体晚期糖基化产物AGEs检测典型图
【评价结论】
在本次实验条件下,与模型对照组相比,样品处理组的皮肤外植体组织中AGEs的平均光密度显著降低,表明样品具有抗糖化功效。
【参考文献】
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