皮肤外植体评价样品对朗格汉斯细胞的保护作用

【实验原理】

朗格汉斯细胞（LCs）是皮肤表皮中的一种树突状细胞，在皮肤中作为抗原呈递细胞参与免疫应答的启动和调节。LCs通过摄取、处理并呈递抗原给T细胞，从而在皮肤免疫反应中起着至关重要的作用。此外，LCs还能通过诱导耐受或介导炎症来影响病理过程。

Langerin是LCs表面的一种C型凝集素受体，对于LCs的功能至关重要，也被认为是LCs的重要标志物之一。Langerin通过识别病原体表面的糖类结构，介导病原体的内吞作用，并将其运输到LCs特有的细胞器中进行降解。此外，Langerin还参与了LCs与其他免疫细胞之间的相互作用，例如促进LCs与DCs之间的聚集，从而促进抗原的转移和交叉呈递。

紫外线（UV）照射对皮肤朗格汉斯细胞有显著影响，紫外线照射导致LCs的数量减少及其功能被抑制，这与皮肤免疫系统的抑制有关。紫外线通过影响LCs的抗原提呈功能、诱导调节性T细胞形成、损伤DNA等途径抑制皮肤免疫系统。然而，也有研究表明，紫外线照射对LCs的影响并非完全负面。例如，紫外线照射可以通过促进LCs向皮肤和淋巴结的迁移，增加淋巴细胞进入皮肤的速率。

因此，可采用紫外照射皮肤外植体建模，通过免疫荧光或免疫组化的方法检测皮肤组织中Langerin的表达，以此来评价样品对朗格汉斯细胞的保护作用。

【评价指标】

朗格汉斯细胞标志蛋白Langerin

【实验方案】

实验一 评价指标免疫荧光检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体处理及无菌培养——加样处理及UVB造模（样品组预先使用待测样品处理24 h或48 h后使用一定剂量的UVB辐射，辐射后24 h收样；模型对照组使用UVB辐射处理，同样品组；正常对照组不做任何处理）——固定——脱水——OCT包埋——冷冻切片——免疫荧光染色——荧光显微镜拍照及分析；

实验二 评价指标免疫组化检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体处理及无菌培养——加样处理及UVB造模（样品组预先使用待测样品处理24 h或48 h后使用一定剂量的UVB辐射，辐射后24 h收样；模型对照组使用UVB辐射处理，同样品组；正常对照组不做任何处理）——固定——石蜡包埋——石蜡切片——免疫组化染色——显微镜拍照及分析；

【结果展示】

图1  朗格汉斯细胞标志蛋白Langerin免疫荧光染色典型图

（绿色指示为Langerin阳性细胞）

图2  朗格汉斯细胞标志蛋白Langerin免疫组化染色典型图

（棕色指示为Langerin阳性细胞）

参考文献

[1]Romani N, Clausen BE, Stoitzner P. Langerhans cells and more: langerin-expressing dendritic cell subsets in the skin. Immunol Rev. 2010;234(1):120-141.

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