皮肤外植体评价样品抵抗高温热老化的作用

【实验原理】

长期暴露在高温下会导致皮肤老化，这种现象被称为热老化。高温环境会导致皮肤水分流失、干燥、粗糙，缺乏水分的皮肤更容易出现细纹和皱纹。高温还会破坏皮脂膜，削弱皮肤的屏障功能，使其更容易受到外界有害物质的侵扰。此外，热老化还能引发皮肤细胞的氧化应激反应，产生大量自由基，引起DNA损伤，导致胶原蛋白和弹性蛋白的过度降解。

因此可利用高温造模，通过H&E染色法观察皮肤外植体在添加样品后皮肤组织的组织形态变化，通过Masson染色观察皮肤组织中胶原纤维密度的改变，通过双光子显微成像技术观察皮肤组织中胶原纤维和弹性纤维变化，以此来评价样品抵抗热老化的作用。

【评价指标】

1、组织形态

2、胶原纤维（Masson染色）

3、胶原纤维、弹性纤维（双光子显微成像）

【实验方案】

实验一 皮肤外植体组织形态检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体预处理及无菌培养——加药及造模处理：正常对照组（不处理）、模型对照组（高温造模处理）、样品组（待测样品处理后给予高温造模）——组织固定——石蜡包埋——石蜡切片——H&E染色——显微镜拍照及分析

实验二 皮肤外植体胶原纤维检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体预处理及无菌培养——加药及造模处理：正常对照组（不处理）、模型对照组（高温造模处理）、样品组（待测样品处理后给予高温造模）——组织固定——石蜡包埋——石蜡切片——Masson染色——显微镜拍照及分析

实验三 皮肤外植体双光子显微成像检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体预处理及无菌培养——加药及造模处理：正常对照组（不处理）、模型对照组（高温造模处理）、样品组（待测样品处理后给予高温造模）——组织包埋——冷冻切片——双光子显微成像及分析

【结果展示】

图1  皮肤外植体组织形态检测典型图

图2  皮肤外植体胶原纤维检测典型图

图3  皮肤外植体胶原纤维和弹性纤维双光子显微成像典型图

【参考文献】

[1] Cho S, Shin MH, Kim YK, et al. Effects of infrared radiation and heat on human skin aging in vivo. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009;14(1):15-19.

[2] Hirth DA, Singer AJ, Clark RA, McClain SA. Histopathologic staining of low temperature cutaneous burns: comparing biomarkers of epithelial and vascular injury reveals utility of HMGB1 and hematoxylin phloxine saffron. Wound Repair Regen. 2012;20(6):918-927.

[3] Yin B, Tang S, Sun J, et al. Vitamin C and sodium bicarbonate enhance the antioxidant ability of H9C2 cells and induce HSPs to relieve heat stress. Cell Stress Chaperones. 2018;23(4):735-748.

[4] Eberlin S , Silva M S D , Facchini G ,et al.The Ex Vivo Skin Model as an Alternative Tool for the Efficacy and Safety Evaluation of Topical Products[J].Alternatives to laboratory animals: ATLA, 2020, 48(1):10-22.

[5] Schroeder AB, Karim A, Ocotl E, et al. Optical imaging of collagen fiber damage to assess thermally injured human skin. Wound Repair Regen. 2020;28(6):848-855.

[6]王艳.二次谐波成像技术及其在胶原蛋白研究中的应用[J].生命的化学,2016,36(02):141-145.

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