利用细胞评价供试品控油功效

【评价原理】

皮脂腺是雄激素的来源和目标组织，皮脂腺中产生脱氢表雄酮，经过一系列的酶催化转化为最活跃的睾酮和5α-双氢睾酮，它们能够刺激皮脂腺细胞的增殖分化（未分化的幼稚细胞首先进行增殖，部分子细胞形成脂滴，并向腺胞中心移动，逐渐发育分化为能储积并分泌脂质的成熟的皮脂腺细胞），也能刺激脂质的合成。本实验通过睾酮诱导脂质合成，通过尼罗红染色法来检测皮脂腺细胞脂质的积累，从而判断供试品是否具有控油功效。

【实验方法】

收集生长状态良好的SZ95细胞，经胰酶消化离心后，用DMEM 完全培养基重悬细胞并调整细胞浓度为1×10^5 个/mL，在6 孔板加入无菌的细胞爬片，每孔均匀接种2 mL细胞悬液，随后将其放置在37℃，5％CO2 培养箱中孵育。待细胞贴壁后，空白组和模型组更换为新鲜培养基，受试物组更换为含受试物的新鲜培养基，用睾酮处理以诱导脂质合成。随后将其放置在37℃，5％CO2培养箱中继续孵育24 h。待孵育24 h后，弃去培养基，用PBS 洗涤2次，室温下4％多聚甲醛固定10 min。固定后，用尼罗红染液（100 μg / mL）染色，并在37℃培养箱中孵育10 min，吸去染液，随后用PBS 清洗3 ~ 5 次，轻轻取出细胞爬片将其放置于载玻片上，并均匀滴加10μL 抗荧光猝灭封片剂。荧光显微镜下观察染色情况，具有强橙红色荧光的细胞是富含脂质的阳性细胞。尼罗红染色检测SZ95细胞质内脂质积累。

【评价指标】SZ95 细胞质内脂质积累

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1 细胞内脂质积累表型图

【评价结论】

供试品组细胞内脂质含量与模型对照组相比减少，初步证明供试品具有控油功效。

【参考文献】

[1]刘武阳.黄连活性成分分离及抑制人皮脂腺细胞雄性激素合成机制研究[D].西南大学2020