标题：Multi-strategy investigation identifies amentoflavone as a novel D3R antagonist for Parkinson's disease treatment

期刊：Phytomedicine（IF11.3，中科院1区TOP）

DOI：10.1016/j.phymed.2026.158487

发表时间：2026.6.23

研究背景

帕金森病（PD）是一种常见的中老年神经系统变性疾病，仍缺乏能缓解症状又延缓病程的治疗手段。天然产物因多靶点、机制可解析等，成为PD药物先导化合物的重要来源。穗花杉双黄酮（AMF）作为一种存在于银杏等植物中的双黄酮类成分，已被证实具有神经保护作用，但其蛋白靶点尚不清楚。

关键发现

本研究采用“AI计算预测-实验验证”的多学科整合策略，结合斑马鱼、小鼠实验等，发现天然双黄酮AMF是结构新颖的多巴胺D3受体（D3R）拮抗剂，具有抗帕金森病潜力，核心发现如下：

斑马鱼实验：在MPTP诱导的斑马鱼PD模型中，AMF能显著改善运动功能障碍，恢复游动距离和平均速度，减轻神经炎症，并保护多巴胺能神经元，有效浓度为100、200、400 µM，400µM效果优于阳性对照D3R拮抗剂PG01037，安全性良好；

小鼠实验：在MPTP诱导的小鼠PD模型中，AMF也能显著改善旷场实验和爬杆实验中的运动表现，保护黑质TH阳性多巴胺能神经元，降低GFAP和Iba-1水平，减轻神经炎症，有效剂量为15、30、60 mg/kg（腹腔注射）。治疗剂量下未见明显脏器毒性，免疫荧光染色证实其对黑质多巴胺能神经元的保护作用；

靶点发现与验证：整合多源靶点预测、机器学习反向虚拟筛选等，建立“AI预测-实验验证”整合框架，鉴定出多巴胺D3受体（D3R）为AMF的关键靶点，模型性能优异，投票分类器AUC达0.99。分子对接和分子动力学模拟显示，AMF稳定结合于D3R正构口袋；CETSA、SIP和FCS实验发现AMF能保护D3蛋白，抵抗高温、有机溶剂变性，且二者结合常数Kd=10.65μM，亲和力可观，证实AMF与D3R的稳定结合及特异性拮抗活性，As 0和Tyr373为关键结合残基；

机制解析：结合小鼠黑质转录组GO和KEGG富集分析，发现除直接D3R拮抗外，AMF还通过PI3K/Akt信号轴产生协同神经保护效应。关键验证实验表明，siRNA敲低D3R后，AMF对MPP⁺诱导的体外损伤的保护作用完全消失，证实D3R是AMF神经保护机制中的核心依赖靶点。

研究意义

· 将天然双黄酮AMF鉴定为结构新颖的D3R拮抗剂，建立“AI计算预测-实验验证”的天然产物靶点发现框架，为PD药物开发与治疗提供了新先导化合物。